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摘要：为评价澳赛康（注射用头孢噻呋钠）及其稀释液对马立克疫苗效力的影响，以马立克疫苗蚀斑生成单位为指标，在体外通过马立克氏活疫苗与澳赛康及其稀释液分别作用0、30、60、90min等4个时间点后接种到鸡胚成纤维细胞中孵育，测定疫苗蚀斑形成单位的变化。结果表明，添加药物后的马立克疫苗在各个时间点蚀斑数与空白组之间没有显著性差异（P>0.05），澳赛康及其稀释液对疫苗效力无影响。本试验为澳赛康及其稀释液和马立克疫苗在临床上的联用提供了实际依据。
关键词：澳赛康，澳赛康稀释液，马立克疫苗，蚀斑形成单位
Effect on PFU after Adding Aosaikang and its dilution into MD Vaccine
Zhou Shuzhen1, Gu Cuipeng1，Sun Yongxue2
（1 Guangdong Eastern Along Pharmaceutical CO., LTD, Foshan, Guangdong, 528234；2 College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou 510642）
Abstract: In order to evaluate the effect of MD vaccine after adding Aosaikang and its dilution, Aosaikang and dilution were added into MD vaccine premixing for 0, 30, 60, 90min, than observe the variation of PFU after inoculate on CEF respectively(n=3). The results showed that Aosaikang and dilution hadn't any adverse to MD vaccine in the premix (n=3) comparing to control group, as a theoretical basis for premix using to clinical.
Key words: Aosaikang; Dilution of Aosaikang; MD Vaccine；PFU
鸡马立克氏病是一种由鸡疱疹病毒引起的一种最常见的淋巴细胞增生性疾病，对我国养鸡业造成了严重威胁和巨大的经济损失[1]。自从鸡马立克苗诞生以来，给该病的控制起到积极的作用。鸡马立克苗常用于1日龄雏鸡免疫，但雏鸡在1～14天饲养阶段极易受到大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、金葡菌等感染而造成死亡。头孢噻呋为半合成第三代动物专用头孢菌素，具有杀菌力强、抗菌谱广、不良反应小以及对β-内酰胺酶稳定等特点，常用于雏鸡以上细菌性感染的预防与治疗。本实验以马立克疫苗蚀斑生成为指标，在体外通过马立克氏活疫苗与澳赛康及其稀释液分别作用0、30、60、90min等4个时间点后接种到鸡胚成纤维细胞中（n=3），培养7天，测定疫苗蚀斑形成单位的变化，旨在客观科学地评价澳赛康及其稀释液是否对马立克疫苗效力产生影响，同时为临床上合理用药提供参考。[作者简介：周淑贞（1980-），女，硕士研究生，主要从事兽药研发
材料与方法
1.1试验药物
澳赛康（注射用头孢噻呋钠，0.1g/瓶，批号20091001）；澳赛康稀释液（10ml/瓶，佛山市南海东方澳龙制药有限公司）；注射用头孢噻呋钠对照品（0.1g/瓶，批号20100201，国内某动保企业）；注射用头孢噻呋钠稀释液对照品（10ml/瓶，国内某动保企业）；马立克冻干活疫苗（批号20100302，上海海利生物制品有限公司）。
1.2 主要仪器
30ml小方瓶80个，吸管若干，100ml盐水瓶5个，500ml盐水瓶1个等。
1.3 试剂准备
试验用SPG液配制：蔗糖76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾（3H2O）1.64g或无水磷酸氢二钾1.25g、L-谷氨酸单钠0.83g，用灭菌水或蒸馏水加至1000mL 滤过除菌，冷冻保存。
试验用备用液配制：由3000羽份马立克疫苗 + 570mL SPG稀释而成；
对照品稀释液和澳赛康稀释液用于药物的快速溶解。
试验分组
空白组：备用液95 mL + 5 mL SPG
对照组Ⅰ：注射用头孢噻呋钠对照品 + 5mL注射用头孢噻呋钠对照品稀释液 + 备用液95 mL
对照组Ⅱ：注射用头孢噻呋钠对照品+ 5mL澳赛康稀释液 + 备用液95 mL
澳赛康组Ⅰ：澳赛康 + 5mL注射用头孢噻呋钠对照品稀释液 + 备用液95 mL
澳赛康组Ⅱ：澳赛康 + 5mL澳赛康稀释液 + 备用液95 mL
鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
取9～10日龄SPF鸡胚按常规方法制备细胞悬液，分装至30ml小方瓶中，每个小方瓶4ml，37℃培养24h即可形成细胞单层。
试验方法
按1.4项下配制好的各组混合液在室温下作用0、30、60、90min等4个时间点后，取以上作用后的混合液用SPG液各进行10倍稀释，最终浓度为每0.2ml约含有200PFU，再用吸管吸取0.2ml稀释液加入单层鸡胚成纤维细胞中（n=3），待凝固后，将瓶倒置，继续培养7天，进行蚀斑计数。
蚀斑（PFU）计数标准
蚀斑应呈清晰，典型，形态不规则，边缘不整齐，呈乳白色，直径约0.5～1.5mm，与空白组的蚀斑一致[1]。
2 结果
各试验组在作用0、30、60、90min等4个时间点后接种的蚀斑数与空白组之间没有显著性差异（P>0.05），表明澳赛康及其稀释液和马立克疫苗连用不会影响疫苗的效价（表1）。
表1 各试验组在各时间点的蚀斑数值表
| 作用时间（min) |
| 组别 | 0 | 30 | 60 | 90 |
| 空白组 | 2129 | 2016 | 1930 | 1860 |
| 对照组Ⅰ | 2088（1.93%） | 1976（2.00%） | 1896（1.76%） | 1772（4.73%） |
| 对照组Ⅱ | 2118（0.52%） | 1958（2.88%） | 1856（3.83%） | 1801（3.17%） |
| 澳赛康组Ⅰ | 2046（3.90%） | 1986（1.49%） | 1887（2.75%） | 1816（2.37%） |
| 澳赛康组Ⅱ | 2104（1.17%） | 1993（1.14%） | 1859（3.68%） | 1810（3.69%） |
注：（1）表中数值表示每组各时间点三份重复样的平均蚀斑数（稀释前浓度）；
（2）括号中百分比表示同一时间点上，各试验组蚀斑数与空白组比较所得出的下降百分比：（空白组-试验组）/空白组。
3 讨论
马立克疫苗作为防御马立克病毒感染的有效手段，已被我国硬性规定列入雏鸡免疫规程中。据现有资料报道，大部分抗生素不能与疫苗混合联用注射，易影响疫苗效价从而导致免疫失败[2]。为验证澳赛康及其稀释液与马立克疫苗联用是否会引起疫苗效力的下降，从而进行了本次试验。结果表明，马立克疫苗在添加澳赛康及其稀释液后，与空白组相比，澳赛康组Ⅱ在90min内对疫苗效力无任何不良影响。因此，按常规要求即马立克疫苗需在开封稀释后60min内用完，澳赛康及其稀释液能与马立克氏疫苗混合使用，不影响疫苗的效力，为临床用药提供指导作用。
比较各试验组蚀斑形成单位的变化，在90min时，与空白组相比试验组的下降率都在2%以上，对照组Ⅰ甚至达到4.73%；60min时，除对照组Ⅰ外，其他试验组的下降率都大于2%，60min以前各试验组的下降率大多数都低于2%。从各组下降的曲线可以看出，同一厂家的注射用头孢噻呋钠和稀释液配合使用（如澳赛康配合澳赛康稀释液使用），对蚀斑的生长影响明显低于不同厂家的搭配，建议在使用注射用头孢噻呋钠时配合使用同一厂家的稀释液，如果与马立克疫苗联合使用，必须在60min内用完，以免影响使用效果。
头孢噻呋作为动物专用的第三代头孢菌素，由于其抗菌活性强，抗菌谱广，药代动力学特征优良，毒副作用小，残留低等特点[3]，在临床上被广泛使用。它的制剂主要有盐酸头孢噻呋混悬液和注射用头孢噻呋钠粉针，其中注射用头孢噻呋钠由于溶解性差而经常对动物体造成刺激作用，经实验证明，澳赛康及其稀释液性质稳定，溶解性好，对机体无刺激作用，与马立克疫苗联用无任何不良影响。
